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序号
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实验项目名称
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学时分配（实验学时/总学时）
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实验内容提要
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实验类型
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实验要求
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主要仪器设备、人员分组等其他需要说明的情况
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1
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理论知识讲授
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8
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系统讲授本部分实验理论知识，包括：本部分实验项目设计、实验项目间的关系、实验知识系统、每个实验的原理、实验目的、实验注意事项等；本部分还包括：交代实验方式、实验册要求、实验报告撰写要求、实验室注意事项、课程考核方式及成绩组成等。
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综合性
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必做
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带多媒体教学设施及空调的教室；全部选课学生听课并作记录；该部分的学生出勤是进入实验室实验的必须条件，以请假等任何原因未参加该部分训练者不得进入实验室实验；学生不能以自修达标替代该部分上课而进入实验室；该部分不提供补修。
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2
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动物细胞总RNA的制备及检测
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4
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细胞培养→提取总RNA→紫外分光光度法测定RNA的含量及纯度→琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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3
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cDNA反转录制备
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4
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细胞总RNA（包含mRNA）→反转录制备cDNA
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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4
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GAPDH基因表达的半定量PCR检测
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4
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设计合成扩增特定基因（GAPDH）的PCR引物→cDNA PCR扩增→琼脂糖电泳
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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5
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GAPDH基因PCR产物的T载体克隆构建
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4
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切胶回收获得特定基因DNA→T载体连接→DNA序列分析
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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6
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细菌及CaCl2法制备感受态细胞
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4
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培养对数期细菌→收集细菌→CaCl2制备法感受态细胞
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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7
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CaCl2法转化质粒
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4
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质粒DNA与感受态细胞混合，经冷却、热激完成转化
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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8
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阳性克隆筛选
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8
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使用抗性筛选及α-互补筛选从大量菌落中筛选出含质粒的阳性菌落
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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9
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质粒的碱裂解法分离纯化
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4
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挑取阳性菌落→液体培养基培养→碱裂解法分离纯化质粒DNA
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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10
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T载体克隆的DNA序列分析
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4
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质粒DNA进一步测定DNA序列，确证插入质粒的目的基因DNA序列正确无误。
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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11
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质粒DNA的RE酶切
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4
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对质粒DNA的RE酶切→琼脂糖凝胶电泳分离→切胶回收目的基因DNA片段
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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12
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GAPDH基因的表达载体构建
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8
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特定基因DNA片段→限制性内切酶酶切→载体DNA连接→细菌转化→阳性克隆筛选
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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13
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蛋白表达的SDS-PAGE检测
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4
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阳性克隆细菌培养→提取总蛋白→紫外分光光度法测定蛋白质的浓度及纯度；细菌总蛋白样品SDS-PAGE→凝胶考马斯亮蓝染色→确定靶蛋白表达水平
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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14
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蛋白表达的
Western Blot检测
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8
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细菌总蛋白样品SDS-PAGE→PVDF转印→抗体化学显色检测→确定靶蛋白表达水平
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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15
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蛋白表达的
ELISA检测
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8
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细菌总蛋白样品→抗体包被96微孔板反应→一抗反应→二抗反应→化学显色→酶标仪测定靶蛋白表达水平
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综合性
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必做
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2人/组；自控进度
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16
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蛋白表达的
2-D检测
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4
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细菌总蛋白样品等电聚焦→SDS-PAGE→考马斯亮蓝染色→分析多种蛋白表达及制备蛋白质谱分析样品
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提高性
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选做
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2人/组；自控进度
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17
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原核表达蛋白产物的纯化
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4
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阳性克隆细菌培养→提取胞质蛋白→亲合层析纯化
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提高性
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选做
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2人/组；自控进度
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18
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原核表达蛋白产物的活性分析
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6
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蛋白酶→测量计算米氏常数的参数→计算米氏常数和抑制常数→了解蛋白酶的动力学特性
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提高性
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选做
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2人/组；自控进度
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19
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实验理论知识考察
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2
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关于本部分所有实验的理论知识考试，考察学生对实验理论知识的掌握程度；考试题目要求考察实验知识的系统性及细节。
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考试
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必做
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全部修课学生；实验室内进行；考试答卷批阅后粘附在实验记录册（实验报告）中；与各实验报告一并扫描转化为pdf电子化文档，交学院教学管理存档。
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